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Normalphasensäulen werden verwendet, wenn die stationäre Phase polarer ist als die mobile Phase. Seit über 15 Jahren liegt unser Hauptaugenmerk auf der Verbesserung von HPLC-Trennungen durch innovative Partikelsäulentechnologie. Unter Berücksichtigung der Anforderungen der Anwendung wurden Morphologien und Phasen entwickelt, um die Trennungsherausforderungen in verschiedenen Marktbereichen sowohl für die Analyse kleiner als auch großer Moleküle zu meistern. Die Agilent ZORBAX-Familie bietet alle Vorteile vollständig poröser Partikelsäulen, wie z. Erhöhte Retention, Beladbarkeit und Beständigkeit gegenüber Probenlösungsmitteln. Diese Beziehung wird auch als normalisierter einheitenloser Faktor dargestellt, der als Retentionsfaktor oder Retentionsparameter bekannt ist.
Die stationäre Phase kann nicht hundertprozentig die Silica-Oberfläche bedecken und eine Reihe von Silanolgruppen bleiben freigelegt. Unsere SFC-Methodenentwicklungsstrategie umfasst immer stationäre Phasen von Agilent Technologies, Inc. Wir schätzen die Robustheit polarer ZORBAX- und Poroshell-Phasen wie ZORBAX Rx-SIL und Poroshell 120 HILIC sehr. Sie weisen eine gute Selektivität und eine hohe Trennleistung auf, was für eine erfolgreiche und effiziente Methodenentwicklung in der SFC von entscheidender Bedeutung ist.
Die physikalischen Eigenschaften von HPLC-Säulen auf Kieselsäurebasis können die Leistung der Trennung fast genauso stark beeinflussen wie die gebundene Phase. Der technische Tipp dieses Monats greift einige der weniger bekannten oder erinnerten Fakten im Zusammenhang mit Silica-Partikeln auf, die für die Chromatographie verwendet werden. Hierbei wird die Probe mit der mobilen Phase durch die stationäre Phase geleitet, wodurch es zur Trennung der Probenbestandteile kommt.
- Per- und Polyfluoralkylsubstanzen (PFAS) sind eine große Gruppe anthropogener Chemikalien, die seit den 1950er Jahren in Industrie-, Gewerbe- und Haushaltsprodukten eingesetzt werden.
- Bei diesem Säulentyp erfolgt die Trennung aufgrund der anziehenden Ionenkräfte zwischen den Molekülen in der Probe und der geladenen stationären Phase.
- Der Detektor markiert außerdem den Entstehungszeitpunkt, die Retentionszeit, die zur Erstidentifizierung des Bestandteils dient.
- Dazu gehören die BioPro IEX-Säulen, die auf einem Polymethacrylat-Basismaterial mit Anionen- und Kationenaustauschfunktionalisierung basieren.
Bei mikroporösen Harzen kann die Sulfonierung jedoch nur die äußere Oberfläche des Partikels erreichen. Bei diesen Materialien wird das Harz zunächst mit einem organischen Lösungsmittel gequollen, um der Säure den Zugang zu tieferen Phenyleinheiten zu ermöglichen. Im Gegensatz dazu eignet sich C8 (auch Octyl genannt) für kürzere Retentionszeiten und liefert schärfere Peaks. Diese Säulentypen eignen sich besser für kleine organische Verbindungen, während C18-Säulen besser für langkettige Fettsäuren und komplexe Moleküle geeignet sind. Sie leiten Ihre mobile Phase (die Flüssigkeit, die Ihre Mischung enthält) durch eine stationäre Phase (einen Feststoff). Die Komponenten durchlaufen die feste Phase mit unterschiedlichen Geschwindigkeiten, wodurch sie im Laufe der Zeit getrennt werden können.
Präparative Säulen (zur Maßstabsvergrößerung / Vorbereitung Im Kleinen Maßstab)
Die meisten aktuellen Methoden zur Trennung biomedizinischer Materialien verwenden Säulen vom Typ C-18, die manchmal auch mit Handelsnamen wie ODS (Octadecylsilan) oder RP-18 (Reversed Phase 18) bezeichnet werden. Dies ist das Material der Wahl für polymerbasierte Umkehrphasensäulen (Asahipak-Reihe), hydrophile Interaktionssäulen (HILICpak) oder Größenausschlusssäulen mit mehreren Lösungsmitteln (Asahipak GF-HQ, kompatibel mit wässrigen und organischen Eluenten). Die HILICpak-Reihe ist mit funktionellen Amino-, quartären Ammonium-, Diol- und Carboxylgruppen in einer Partikelgröße von 5 μm und 100 Å Poren erhältlich. In allen Fällen weist die stationäre Phase ein sehr geringes Bluten auf, wodurch PVA-basierte Säulen hervorragend für Massenspektrometriedetektoren geeignet sind. Anschließend werden die Hydrogelkügelchen erhitzt (getrocknet), um ein Xerogel herzustellen. Der pH-Wert, die Temperatur, die Katalysatoren und Lösungsmittel sowie die Silica-Sol-Konzentration steuern alle die Partikel- und Porengröße der hochporösen Silica-Xerogel-Materialien (manchmal auch Sol-Gel genannt).
HPLC-Säulen
Die Kugelform sorgt für eine höhere Effizienz und einen geringeren Gegendruck, und die Porosität vergrößert die Oberfläche. Polymerharze sind stark https://hplc-shop.de/ vernetzt und eignen sich besonders für Trennungen, bei denen der pH-Wert außerhalb des Betriebsbereichs der Silica-Packung liegt. Viele stationäre Phasen sind porös, um eine größere Oberfläche bereitzustellen.
Nach Abschluss der Polymerisation wird der Eluent ausgewaschen und es bleibt eine schwammige, aber starre Struktur zurück. Aufgrund der zusätzlichen Kohlenstoffe verfügt C18 über eine größere Oberfläche, über die die mobile Phase wandern muss. Dies bietet mehr Interaktionszeit zwischen der gebundenen Phase und den Eluierten. Bei der Umkehrphasen-HPLC ist die mobile Phase hydrophil, während die stationäre Phase hydrophob ist. Das bedeutet, dass Moleküle durch abnehmende Polarität durch die Verwendung eines organischen Lösungsmittels eluiert werden.
Die Zugabe eines Initiators wie Benzoylperoxid löst die Polymerisation aus und das Polymer wächst innerhalb der Tropfengrenzen. Durch die Regulierung der Rührgeschwindigkeit und der Temperatur ist es möglich, die Größe und die Gleichmäßigkeit der Größenverteilung der resultierenden kugelförmigen Perlen zu steuern. Um poröse Harze zu synthetisieren, enthalten die suspendierten Tröpfchen ein Verdünnungsmittel, das als gutes Lösungsmittel für die Monomere, nicht jedoch für das polymerisierte Harz ausgewählt wurde. Während das Polymer wächst, werden nanometergroße Pools des Verdünnungsmittels in der Matrix eingeschlossen.
Hersteller geben häufig ein D10/90-Verhältnis an – das Verhältnis der Partikelgrößen am 10. Dies gibt einen Hinweis auf die Breite der Partikelgrößenverteilung, wobei ein Wert von 1,2 oder weniger als sehr gut gilt. UHPLCs ist ein führender Hersteller von HPLC-Säulen und Verbrauchsmaterialien für die Flüssigkeitschromatographie. Das Unternehmen bietet eine breite Produktpalette an, darunter leere HPLC-Säulen, Lösungsmittelfilter, Vorsäulen, Inline-HPLC-Säulen und PEEK-Verbrauchsmaterialien.
Die Bildung dieser Komplexe beinhaltet die Beteiligung gemeinsamer molekularer Kräfte wie der Van-der-Waals-Wechselwirkung, der elektrostatischen Wechselwirkung, der Dipol-Dipol-Wechselwirkung, der hydrophoben Wechselwirkung und der Wasserstoffbindung. Eine effiziente biospezifische Bindung entsteht durch die gleichzeitige und konzertierte Wirkung mehrerer dieser Kräfte an den komplementären Bindungsstellen. Bei der Hochleistungsaffinitätschromatographie (HPAC)[26] wird eine Probenlösung durch eine Säule geleitet, die mit einer stationären Phase gefüllt ist, die einen immobilisierten biologisch aktiven Liganden enthält.
Hipersep® Prochrom HPLC-Säulen sind auch mit Zubehör erhältlich, um den Verpackungsprozess einfacher und effizienter zu gestalten. Die Aufschlämmungseinheiten sind in Größen von 40 l bis 800 l für größere Säulendurchmesser erhältlich und ermöglichen ein schnelles und dichtes Säulenpacken, ohne dass ein Gleichgewichtsschritt erforderlich ist. Darüber hinaus werden mehrere Handhabungswerkzeuge speziell für Säulenpackungs- und Wartungsarbeiten angeboten, die eine sichere und schnelle Bedienung durch einen einzelnen Bediener ermöglichen .