Inhaltverzeichnis
Dieses Buch bietet einen umfassenden Überblick und vermittelt ein grundlegendes Verständnis der Funktionsweise von HILIC. Mit Beiträgen führender analytischer Wissenschaftler, die über umfassende Erfahrung in HILIC und HPLC verfügen, und Schritt-für-Schritt-Anleitungen zur Entwicklung effizienter, empfindlicher und robuster HILIC-Methoden dient dieses Buch als praktischer Leitfaden für Forscher. Sobald Proteine auf der stationären Phase immobilisiert wurden, werden Proteine, die nur schwach oder unspezifisch mit dem Harz interagieren, durch Waschen der Säule mit mehreren Säulenvolumina Waschpuffer entfernt.
Die stationäre Phase haftet an der Innenseite eines Glasrohrs mit kleinem Durchmesser (einer Kapillarsäule) oder an einer festen Matrix in einem größeren Metallrohr (einer gepackten Säule). Chromatographie ist eine Trennmethode, bei der der Analyt in einer flüssigen oder gasförmigen mobilen Phase kombiniert wird, die durch eine stationäre Phase gepumpt wird. Abhängig von ihrer Polarität interagieren sie mehr oder weniger lange mit der stationären Phase und werden dadurch mehr oder weniger stark verzögert. Jede Probenkomponente eluiert aus der stationären Phase zu einer bestimmten Zeit, die als Retentionszeit bezeichnet wird. Während die Komponenten den Detektor passieren, wird ihr Signal aufgezeichnet und in Form eines Chromatogramms aufgezeichnet. Die stationäre Phase ist eine entscheidende Komponente der Chromatographie, die beim Durchgang mit den Analyten interagiert und so zur Trennung führt.
- Die unterschiedliche Löslichkeit des Analyten ist auf die unterschiedliche Affinität bzw.
- Bei der Gaschromatographie ist die mobile Phase ein Inertgas, beispielsweise Helium oder Stickstoff.
- Die Flüssigkeitschromatographie ist eine chromatographische Technik, bei der die mobile Phase flüssig ist.
- Es wird als Methode zur Bestätigung der Ergebnisse von Synthesereaktionen verwendet, da Reinheit bei dieser Art von Forschung von entscheidender Bedeutung ist.
- Die unter bestimmten Bedingungen gemessene Retentionszeit ist ein identifizierendes Merkmal eines bestimmten Analyten.
Die Größenausschlusschromatographie (SEC) wird auch als Gelpermeationschromatographie (GPC) oder Gelfiltrationschromatographie bezeichnet und trennt Moleküle nach ihrer Größe (oder genauer nach ihrem hydrodynamischen Durchmesser oder hydrodynamischen Volumen). Kleinere Moleküle können in die Poren eindringen des Mediums und daher werden Moleküle eingefangen und aus dem Fluss der mobilen Phase entfernt. Die durchschnittliche Verweilzeit in den Poren hängt von der effektiven Größe der Analytmoleküle ab. Allerdings werden Moleküle, die größer als die durchschnittliche Porengröße der Packung sind, ausgeschlossen und unterliegen daher im Wesentlichen keiner Retention; Solche Arten werden als erste eluiert.
Die quantifizierten Parameter sind Vitamine, Hormone, Metaboliten, Tumormarker und Medikamente in Körperflüssigkeiten. In der Pharmakologie wird die Chromatographie verwendet, um die Reinheit und Wirksamkeit von Arzneimitteln abzuschätzen. Die Chromatographie kann Umweltproben auf Medikamente, Toxine und Schadstoffe analysieren und dabei helfen, viele neue Biomoleküle zu entdecken, indem sie Einblicke in Krankheitsmechanismen und die Entdeckung von Biomarkern liefert. Die Bodenzahl N als Kriterium für die Systemeffizienz wurde für isokratische Bedingungen entwickelt, d. Man könnte es sich auch als Laufzeit vorstellen, gemessen in der durchschnittlichen Breite der Peaks.
Größenausschlusschromatographie
Gase weisen im Vergleich zu Flüssigkeiten auch eine höhere Permeabilität innerhalb fester Träger auf. Der Retentionsmodus von HPLC-Säulen PolyLC hängt von Polaritätsunterschieden oder Molekülgrößen ab, wohingegen GC-Trennungen auf Unterschieden in der Flüchtigkeit von Verbindungen basieren. HPLC verwendet eine flüssige mobile Phase, dabei handelt es sich im Allgemeinen um Gemische von Lösungsmitteln kompatibler Polaritäten. Bei der Umkehrphasenchromatographie ist dies üblicherweise eine Kombination aus Wasser und entweder Acetonitril oder Methanol. Die Gaschromatographie ist eine Technik zur Trennung flüchtiger Komponenten in der Gasphase. Die Gaschromatographie ist eine chromatographische Technik, bei der ein Inertgas als mobile Phase verwendet wird.
Anionenaustauschchromatographie (IEC)
Es ist möglich, eine Reihe unaufgelöster Peaks auf eine zweite Säule mit unterschiedlichen physikalisch-chemischen (chemischen Klassifizierung) Eigenschaften zu leiten. Da sich der Retentionsmechanismus auf diesem neuen festen Träger von der eindimensionalen Trennung unterscheidet, kann es möglich sein, Verbindungen zu trennen, die durch eindimensionale Chromatographie nicht unterscheidbar sind. Die Größenausschlusschromatographie (SEC) wird auch als Gelpermeationschromatographie (GPC) oder Gelfiltrationschromatographie bezeichnet und trennt Moleküle nach ihrer Größe (genauer gesagt nach ihrem hydrodynamischen Durchmesser oder hydrodynamischen Volumen). Kleinere Moleküle können in die Poren eindringen die Medien und; Daher dauert die Elution länger, während größere Moleküle aus den Poren ausgeschlossen werden und schneller eluieren.
Verdrängungschromatographie
Die Chromatographie ist eine von mehreren Trenntechniken, die als differenzielle Migration aus einer schmalen Anfangszone definiert werden. In diesem Fall ist die treibende Kraft ein elektrisches Feld, das unterschiedliche Kräfte auf gelöste Stoffe mit unterschiedlicher Ionenladung ausübt. Die Kombination dieser Kräfte führt zu Ionenmobilitäten, die jedem gelösten Stoff eigen sind. Wesentliche Bestandteile eines HPLC-Geräts sind Lösungsmitteldepot, Hochdruckpumpe, kommerziell hergestellte Säule, Detektor und Rekorder. Die Dauer der Trennung wird mit Hilfe eines computergestützten Systems gesteuert und Material fällt an [25].
Der Schlüssel zur Trennung sind die unterschiedlichen Affinitäten zwischen Analyt, stationärer Phase und mobiler Phase. Der Beobachter könnte den Detektor darstellen, der in einigen Formen der analytischen Chromatographie verwendet wird. Ein wichtiger Punkt ist, dass der Detektor nicht in der Lage sein muss, zwischen den Analyten zu unterscheiden, da diese vor dem Passieren des Detektors getrennt wurden.
Dem Modellabschnitt wird normalerweise keine physikalische Bedeutung zugewiesen und er wird nur zur Berechnung der Retention für einzelne Spalten verwendet. Es wird vom Phasenverhältnis dominiert, wenn die abhängige Variable der Retentionsfaktor ist. Die Systemkonstanten und ihre Variation mit der Temperatur werden verwendet, um die Selektivität der stationären Phase und den Einfluss der Temperatur auf die Selektivität zu charakterisieren. Bei der Adsorptionschromatographie werden je nach Absorptionsvermögen der Komponente verschiedene Verbindungen in unterschiedlichem Maße am Adsorbens adsorbiert. Auch hier wird eine mobile Phase dazu gebracht, sich über eine stationäre Phase zu bewegen, wodurch die Komponenten mit höherem Absorptionsvermögen über eine geringere Entfernung transportiert werden als die mit geringerem Absorptionsvermögen.
Bei der Gaschromatographie ist die mobile Phase ein Inertgas, häufig Helium oder Stickstoff. Die stationäre Phase ist normalerweise eine mikroskopisch kleine Schicht aus Flüssigkeit oder Polymer auf einem inerten Feststoff oder Träger. Dieses befindet sich in einem spiralförmigen Glas- oder Metallrohr, das auch Säule genannt wird. Am Ende befindet sich ein Detektionssystem, das die einzelnen Komponenten erkennt, während sie aus der Säule eluieren. Bei komplexen chromatographischen Trennungen kann es zu einer Koelution (bei der mehrere Komponenten gleichzeitig von der Säule eluieren) kommen.